当使用不同类型的细胞时,细胞计数分析的考虑

新利国际娱乐贝克曼·库尔特生命科学公司很荣幸向大家介绍我们的18luck fyi .Vi-CELL BLU利用了VI-CELL XR但是,包括多年来我们的客户要求的许多设计改进。

虽然看似简单的应用,自动细胞计数可以受到样品和仪器产生的各种条件和变量的影响。使用新的VI-Cell Blu,我们已经引入了将96个样品加载到标准板中的能力,并将其作为单一实验运行。然而,这需要大约3小时才能运行整个板块,可能不是理想的,特别是对于通常具有低活力或在培养箱外或生物反应器外易于劣化的细胞类型。

板装载机还允许我们在单一的运行中评估多个不同的实验条件,从而提供有机会评估一系列条件或标准。

为了证明这些能力,我们审查了使用标准单元的几种不同的细胞类型和细胞准备方法。

VI Cell Blu侧面装载图像

细胞计数分析

Cho(中国仓鼠卵巢),EL4(小鼠T淋巴细胞细胞系),SF9(来自Spodoptera Frugiperda的卵巢组织)和HeLa细胞的细胞培养物用于评估长分析持续时间和不同样品制备条件对不同的影响细胞类型。

CHO细胞样品制备影响

离心和再悬浮是在重新播种或用于其他实验之前清洗和浓缩细胞的常规方法。CHO细胞通常被认为相当耐用,但它们确实有非常特殊的生长要求,需要特殊的培养基才能达到最佳健康状态。在下面的实验中,细胞在1000 g下离心5分钟(相对温和的旋转),然后在培养基或缓冲液中重悬,以评估细胞制备对细胞健康的影响(如果有的话)

结果

治疗 浓度(M /毫升) 可行性 (%) 直径(µm)
未经处理的 4.83 94.30. 16.12
1旋转重悬在介质中 5.05 94.48 16.17
1旋转在PBS中 4.70 65.69 14.17
2旋转在PBS中重悬 4.45 53.77 13.99.

结果表明,推荐介质中的离心和重悬浮对CHO细胞没有明显的影响。然而,PBS缓冲液中的重生导致可活力的急剧丧失和平均细胞直径的显着降低。在重新悬浮期间,还可以预期损失的细胞浓度略微降低。在PBS中纺丝和重悬于PBS中的第二次对细胞活力和细胞尺寸的进一步产生负面影响

样品制备方法对CHO细胞浓度的影响 样品制备方法对CHO活力与直径的影响

图2。样品制备方法对CHO细胞的影响

EL4细胞混合周期分析

通常认为EL4细胞是脆弱的,即使在理想条件下也会缓慢生长并且显示活力<70%。制备EL4细胞并分配到96个孔板中。使用标准哺乳动物细胞谱作为源和不同水平的混合循环产生细胞型曲线。目标是评估在已知的细胞类型上增加搅拌的影响,如果是通过涡旋混合和离心容易损坏的细胞类型

结果

EL4细胞的结果如下:

混合周期 细胞计数 可行的细胞计数 浓度(M /毫升) 可行性 (%) 直径(µm)
1 4648. 2837. 1.72 61.06. 11.34
3. 4637. 2715. 1.72 58.54 11.34
5. 4660. 2582 1.73 55.69 11.34
7. 4660. 2448. 1.73 52.53 11.32

虽然细胞计数、浓度和直径值没有统计学意义,但随着所有稀释液混合周期的增加,活细胞计数显著下降,因此细胞活力也显著下降。这可能表明,具有减少吸入和混合循环的槽型剖面可能更适合这种类型的槽型,过度搅拌可能不是理想的,应该避免

混合循环对EL4细胞活力的影响

图3。混合循环对EL4细胞的影响

SF9昆虫细胞

即使在理想条件下生长,SF9细胞不容易达到高密度,通常具有低于60%的活力。因此,板路运行所需的长时间仪器时间可能会对细胞培养产生负面影响。为了评估该SF9细胞,使用标准昆虫细胞谱进行电镀并运行。

结果表明,在3小时的运行过程中,没有检测到对细胞活力的影响,细胞直径没有明显的变化,如果细胞死亡或肿胀。因此,该细胞系虽然存活率低,但足够健壮,可以在细胞培养箱外的环境中长时间存活,而不会产生不良影响

随着时间的推移,细胞活力和SF9细胞的平均直径

图4。随着时间的推移,SF9细胞的活力和平均直径。在实验过程中没有明显改变。

Hela细胞培养

Hela细胞生长至高汇合状态,以应对细胞。然后收获细胞并分散到悬浮液中。然后将细胞在96个孔板上铺出,并使用标准哺乳动物细胞分布收集的数据。板通过列进行数据收集数据,以确保行之间的样本之间的相同时间间隔。

有人指出,板路运行的后期样品报告略高浓度。进一步的研究表明,随着时间的推移,细胞的平均直径增加。

HeLa细胞的平均直径随时间增加的百分比

图5。随着时间的推移,Hela细胞平均直径增加百分比

观看获取的图像显示越来越多的细胞,似乎肿胀或膨胀以及大量的非蜂窝囊泡。虽然后者通常不会影响细胞计数,但根据细胞剖面设置,它们可以计数为小单元。膨胀效应导致平均细胞直径在运行板的3小时内增加几乎10%,并且可能导致刚刚低于下直径阈值的一些较小的电池,以便包括在细胞计数中。

体外培养>2小时后HELA细胞肿胀、起泡

图6。体外培养>2h后HELA细胞肿胀起泡

结论

在一个完整的培养皿上进行细胞培养之前,建议进行一些初步评估,以确定所涉及的细胞的健壮性,以及它们对样品制备方法和长时间暴露在培养箱外环境的耐受能力。即使是工程细胞,如CHO细胞或不朽HELA细胞,通常被选择为相当耐用的,也可能受到应力或特定的样品制备条件的影响。

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